自21世紀(jì)，生物技術(shù)進(jìn)入高速發(fā)展期，開發(fā)出結(jié)構(gòu)更加復(fù)雜、表達(dá)量更高的生物大分子樣品。隨之而來對(duì)生物藥物的制備技術(shù)及工藝提出挑戰(zhàn)，層析技術(shù)具有優(yōu)異的分離效果、溫和的色譜條件對(duì)生物大分子十分友好，可以保證生物樣品活性，是目前下游純化的首選方法。離子交換層析技術(shù)可用于抗體、VLP、蛋白、mRNA、質(zhì)粒、多肽等生物大分子的純化，在樣品粗純、中純以及精制中應(yīng)用廣泛，在四大層析技術(shù)中占據(jù)重要地位。
賽分科技專注于色譜層析技術(shù)，為應(yīng)對(duì)復(fù)雜生物大分子樣品的純化，保證填料較高載量的同時(shí)，進(jìn)一步提升填料的耐堿性能，延長(zhǎng)填料使用壽命，我們推薦兩款具有高耐堿、高回收率的陰離子交換填料，分別為強(qiáng)陰離子交換填料Monomix Mab60-Q以及弱陰離子交換填料Monomix HC60-DEAE Excel。
*強(qiáng)陰離子交換基團(tuán)為季銨，弱陰離子交換基團(tuán)二乙氨基
產(chǎn)品介紹
Monomix AEX陰離子交換層析介質(zhì)均以親水性聚甲基丙烯酸酯為基質(zhì)，粒徑為60 μm，孔徑1000 Å，具有良好的物理化學(xué)穩(wěn)定性。Monomix AEX為觸手型陰離子交換層析填料，觸手是長(zhǎng)線形的聚合物鏈，攜帶功能配位體，聚合物鏈與基質(zhì)以共價(jià)鍵連接，該構(gòu)型提供了高比表面積，使生物分子不受空間位阻，與可及的配位體結(jié)合?？蓮V泛適用于抗體、疫苗、胰島素、蛋白、核酸、肝素等生物樣品的分離和純化。
填料性能參數(shù)
產(chǎn)品特點(diǎn)
更高的耐堿性——延長(zhǎng)使用壽命，降低生產(chǎn)成本
更低工作壓力——易于放大，適應(yīng)大規(guī)模制備
高蛋白回收率——高回收率，減少損失
更優(yōu)pH平衡能力——更高效的操作
高耐堿性-Monomix Mab60-Q
考察Monomix Mab60-Q填料在1 M NaOH中浸泡，樣品的保留時(shí)間及DBC的變化情況，結(jié)果表明1 M NaOH泡堿240 h后，標(biāo)準(zhǔn)蛋白保留時(shí)間（表1）未出現(xiàn)明顯變化，DBC維持在90%以上(表2)。
表1 Monomix Mab60-Q填料泡堿前、后保留時(shí)間變化
表2 Monomix Mab60-Q填料泡堿前、后DBC的變化
高流速-Monomix Mab60-Q
Monomix Mab60-Q離子交換填料在常規(guī)線速度下（100~200 cm/h）壓力為0.5 bar左右，在1000 cm/h 線速度下壓力在2.4 bar左右，操作壓力低，有利于放大生產(chǎn)。
圖1 Monomix Mab60-Q壓力-流速曲線
非特異性吸附低-Monomix Mab60-Q
采用標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白（BSA）檢測(cè)填料的非特異性吸附（NSB，圖2），BSA標(biāo)準(zhǔn)樣品連續(xù)上樣16次，進(jìn)樣量不變，對(duì)樣品峰面積進(jìn)行積分，計(jì)算第一針樣品與最后一針樣品峰面積百分比，結(jié)果顯示BSA重復(fù)上樣后比值為97.2%，表現(xiàn)出較低的非特異性吸附。
圖2 Monomix Mab60-Q非特異性吸附(NSB)測(cè)試峰面積趨勢(shì)圖(BSA)
案例展示-Monomix Mab60-Q
實(shí)驗(yàn)考察賽分科技軟膠陰離子交換填料Agarosix Q FF填料與硬膠Monomix Mab60-Q對(duì)雙抗樣品中HCP的去除效果（表3），結(jié)果顯示Monomix Mab60-Q在雙抗樣品HCP去除實(shí)驗(yàn)中蛋白回收率大于97%；HCP去除率及蛋白收率與Agarosix-Q FF相近。
表3 Monomix Mab60-Q與Agarosix Q FF某雙抗樣品中HCP去除及收率對(duì)比
*注：HCP殘留檢測(cè)中標(biāo)曲從0-100 ng/mL，原樣檢測(cè)到HCP濃度超過線性范圍最大值100 ng/mL。
高耐堿性-Monomix HC60-DEAE Excel
考察Monomix HC60-DEAE Excel填料在1 M NaOH中浸泡，樣品在填料中保留時(shí)間及DBC的變化情況。結(jié)果表明1M NaOH泡堿240 h后，標(biāo)準(zhǔn)蛋白保留時(shí)間未出現(xiàn)明顯變化，DBC維持在85%以上。
表4 Monomix HC60-DEAE Excel填料泡堿前、后保留時(shí)間變化
表5 Monomix HC60-DEAE Excel填料泡堿前、后DBC的變化
高流速-Monomix HC60-DEAE Excel
Monomix HC60-DEAE Excel填料在常規(guī)線速度下（100~200 cm/h）壓力為0.5 bar左右，在1000 cm/h 線速度下壓力在2.0 bar左右，操作壓力低。
圖3 Monomix HC60-DEAE Excel壓力-流速曲線
低非特異性吸附-Monomix HC60-DEAE Excel
采用標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白（BSA）檢測(cè)填料的非特異性吸附（NSB，圖4），BSA重復(fù)進(jìn)樣16次，計(jì)算第一針與最后一針的峰面積比值為98.6%，結(jié)果顯示該填料對(duì)標(biāo)準(zhǔn)蛋白BSA的非特異性吸附低。
圖4 Monomix HC60-DEAE Excel NSB測(cè)試峰面積趨勢(shì)圖（ BSA ）
良好的pH值穩(wěn)定性- Monomix HC60-DEAE Excel
實(shí)驗(yàn)條件：
Column: 0.3421*16.5=5.645 mL
Mobile Phase: A1：0.5M NaOH
A2：10mM Tris+3%蔗糖+1M NaCl
A3：50mM Tris+3%蔗糖
Flow rate：1.129 mL/min
——Cond；—— pH值
圖5 Monomix HC60-DEAE Excel填料pH穩(wěn)定性測(cè)試圖譜
Monomix HC60-DEAE Excel在高鹽切低鹽后3-4 CV能達(dá)到pH平衡且穩(wěn)定，可以實(shí)現(xiàn)快速、高效操作。
歡迎試用、訂購Monomix Mab60-Q & Monomix HC60-DEAE Excel
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